24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко


страница2/3
1   2   3

СХЕМА
ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ПАРАГЕМОЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ
(МОДИФИЦИРОВАННАЯ СХЕМА ГРИГОРЬЕВА В СОАВТОРСТВЕ, 1975)
                           Исследуемый материал
1-процентная пептонная вода                             Элективная
с 3-процентным хлористым                               

дифференциальная
натрием (среда накопления)                              среда (37 °С,

24 ч)
Элективная
дифференциальная среда
                             Типичные колонии
           Пересев на среду Хью-Лейфсона и на ЩМПА (определение
           оксидазной активности, окраска по Граму, подвижность)
---------------------------------------------------------------------

--------------
1-процент- 1-процент- Среда       Среда       Среда ДАВГ   Среда

Гисса    Кровяной
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
ная ПВ,    ная ПВ с   Кларка <*>  Кларка <*>  (37°, 24 ч)  <***> с 3-

     агар с
содержащая 3-процент- с 3-про-    с 3-про-    Аргинин (-) 

процентным     7-про-
NaCl (37°, ным        центным     центным     <**>        

хлористым      центным
18 час.)   хлористым  хлористым   хлористым   Лизин (+)    натрием

<*>    хлористым
0% - (-)   натрием и  натрием     натрием                  (37°, 18

час.) натрием
3% - (+)   триптофа-  (37°,       (37°,                    Арабиноза

(+)  (37°,
8% - (+)   ном (37 °С 24 час.).   24 час.).                Глюкоза

(+)    24 час.)
10% - (-)  18 - 24    Реакция     Реакция с                Инозит (-

)     Гемолиз
           час.).     Фогес-      метиловым                Ксилоза (-

)    (+/-)
           Образова-  Проскауэра  красным (+)              Лактоза (-

)
           ние индола (образова-                           Мальтоза

(+)
           (+)        ние ацетил-                          Маннит (+)
                      метилкарби-                          Сахароза

(-)
                      нола) (-)                            Сорбит (-)
--------------------------------
<*> Содержание хлористого натрия в средах для определения биохимических свойств бактерий

уменьшено до 3% вместо 5%.
<**> Уменьшено количество аминокислот до 2 (аргинин, лизин) при определении

декарбоксилазной активности.
<***> Уменьшено количество углеводов и спиртов при определении способности их

ферментации.
Вибрионы окисляют и ферментируют глюкозу - псевдомонады только окисляют.
4.4.2. Определение подвижности
Подвижность культур можно определить несколькими способами:
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
а) При микроскопии суточных культур с пептонной воды или щелочного агара в разбавленной

капле с фазовоконтрастным объективом. Подвижные культуры активно перемещаются в поле зрения.
б) Посевом культуры уколом в столбик 0,25 - 0,3% полужидкого питательного агара. Подвижные

культуры дают диффузное помутнение всего столбика, неподвижные и слабо подвижные вырастают

только по уходу укола.
4.4.3. Определение оксидазной активности (см. п. 4.2.2)
4.4.4. Определение степени галофилии
Способность выделенных штаммов к росту на пептонной воде с различным содержанием

хлористого натрия является важным дифференциальным признаком при идентификации

парагемолитических вибрионов в их делении на два биотипа. Для определения степени галофилии

по 0,06 куб. см (1 капле) 3 - 4 часовой культуры засевают в пробирки с 5 куб. см 1-процентной

пептонной воды, содержащей 0%, 8% и 10% хлористого натрия. Посевы инкубируют в течение 18 -

24 часов, рост определяют по помутнению среды. Парагемолитические вибрионы не растут на среде

без хлористого натрия и дают обильное помутнение в пробирках с 8-процентным хлористым

натрием, а алгинолитические - в пробирках с 8, 10% хлористого натрия. Иногда из внешней среды

выделяются культуры парагемолитических вибрионов, способные к росту в присутствии 10-

процентного хлористого натрия.
4.4.5. Ферментация углеводов и спиртов
Парагемолитические вибрионы обладают небольшим периодом генерации, что позволяет в

короткий срок определить их биохимическую активность в отношении различных углеводов и

спиртов. Из широкого набора углеводов и спиртов диагностическое значение для идентификации

парагемолитических вибрионов имеет ферментация маннита, сахарозы, арабинозы, маннозы и

инозита.
Ферментативную активность выделенных культур определяют на средах Гисса, содержащих 3%

хлористого натрия. Посевы инкубируют в течение 24 часов при температуре 37 °С. При посеве

густой бактериальной суспензии результаты можно учитывать уже через 6 часов.
О ферментации судят по изменению цвета среды в пробирках, об образовании газа - по

наличию пузырьков в толще полужидкой среды или в поплавках. Ферментация сопровождается

подкислением среды и изменением ее цвета в желтый при использовании в качестве индикатора

бромтимолового синего и в ярко-розовый - с индикатором Андреде.
Для парагемолитического вибриона характерна ферментация без газообразования глюкозы,

маннита и маннозы, для алгинолитического - глюкозы, маннита, маннозы, сахарозы и арабинозы.
Выделены штаммы парагемолитического вибриона, способные к ферментации сахарозы и

арабинозы, а штаммы алгинолитического вибриона не разлагают арабинозу.
4.4.6. Определение протеолитической активности
Наличие протеолитической активности определяют посевом исследуемых культур на

питательную желатину. Культуры засевают уколом в столбик желатины, посевы инкубируют при

температуре 37° в течение 24 часов. Затем пробирки с посевами и контрольную пробирку на

некоторое время (20 - 30 мин.) помещают в холодильник. При положительном результате в засеянной

пробирке желатина остается жидкой, а в контрольной - затвердевает. Парагемолитические вибрионы

обладают протеолитической активностью.
4.4.7. Определение способности образовывать ацетилметилкарбинол (реакция Фогес-
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Проскауэра)
Для определения способности образовывать ацетилметилкарбинол ставят реакцию Фогес-

Проскауэра. Исследуемые культуры засевают в пробирки с 5 куб. см глюкозофосфатного бульона

Кларка с 3% хлористого натрия, выращивают в течение суток при 37 °С. К 1 мл выросшей культуры

добавляют 0,6 альфа-нафтола (6-процентный р-р в абсолютном спирте) и 0,2 куб. см 40-процентного

едкого калия (KOH). Пробирки хорошо встряхивают и помещают в термостат на 30 минут при 37 °С.

При положительной реакции наступает рубиново-красное окрашивание среды.
4.4.8. Образование индола
Выявление способности образовывать индол определяют на 1-процентной пептонной воде с

0,03% DL-триптофана и 3% хлористого натрия. Культуры засевают в пробирки и под ватно-марлевые

пробки вставляют бумажки для определения индола. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 24

часов. Наличие индола в среде можно определить также при помощи реактива Эрлиха или Ковача.

Появление в среде красного кольца или красного окрашивания после внесения одного из реактивов и

1-часовой инкубации в термостате свидетельствует о наличии индола.
4.4.9. Реакция с метиловым красным
В 18 - 24-часовую культуру, выросшую на среде Кларка с 3-процентным хлористым натрием

при температуре 37 °С, по каплям (3 - 5 капель) прибавляют 0,04-процентный р-р метилового

красного. Пробирки хорошо встряхивают и на час помещают в термостат при температуре 37 °С. При

сильном кислотообразовании среда окрашивается в красный цвет, при слабом - в желтый.
4.4.10. Определение декарбоксилазной активности
Декарбоксилазная активность выделенных культур является важнейшим дифференциальным

признаком, позволяющим отличить парагемолитические вибрионы от сходных с ними по свойствам

аэромонад. Для вибрионов характерно наличие декарбоксилазы лизина и отсутствие декарбоксилазы

аргинина. Аэромонады способны декарбоксилировать аргинин.
Декарбоксилазную активность выделенных микроорганизмов определяют на

модификацированной среде ДАГВ (Григорьев Ю.И. и др., 1975). По 2 петли (0,2 куб. см) бульонной

исследуемой суточной культуры бактерий засевают в 3 пробирки с 2 куб. см среды ДАГВ. Одна

служит контролем, две другие содержат аминокислоты: аргинин и лизин. После посева в каждую

пробирку для создания анаэробных условий вносят по 0,5 куб. см стерильного вазелинового масла.

Посевы инкубируют при 37 °С в течение 24 часов. Культуры, у которых отсутствуют декарбоксилазы

указанных аминокислот, не расщепляют аминокислоты, но окисляют глюкозу, что приводит к

изменению окраски среды в желтый цвет, который сохраняется в течение всего времени наблюдения

как в опытах, так и в контрольных пробирках. При наличии декарбоксилаз после окисления глюкозы

и перехода окраски среды в желтый цвет начинается ощелачивание среды за счет разложения

аминокислот, и среда вновь приобретает темно-фиолетовую окраску. Парагемолитические вибрионы

обладают декарбоксилазной активностью в отношении обеих аминокислот: аргинина и лизина.
4.4.11. Определение гемолитической активности
Способность культур парагемолитических вибрионов гемолизировать эритроциты человека или

кролика на кровяном агаре, содержащем 7% хлористого натрия, коррелирует с энтеропатогенными

свойствами этих микроорганизмов.
Для определения гемолитической активности используется среда Вагатцума или кровяной агар

в модификации, предложенной Григорьевым с соавторами.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
1 петлю суточной бульонной культуры или культуры со ЩМПА рассеивают штрихом или сеют

"бляшкой" на кровяной агар. Чашки инкубируют при температуре 37 °С 24 - 48 часов. Вокруг колоний

культур, обладающих гемолитической активностью, образуются различного диаметра прозрачные

зоны гемолиза эритроцитов.
5. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КОНТРОЛЯ
Употребление в пищу моллюсков, зараженных патогенной для человека микрофлорой, в сыром

или недостаточно термически обработанном виде может привести к пищевым отравлениям и другим

серьезным заболеваниям. В странах, занимающихся разведением и промыслом моллюсков, вопросы

санитарного контроля моллюсков постоянно находятся в центре внимания санитарных служб. На

важность санитарного контроля за соблюдением гигиенических правил при разведении и реализации

моллюсков и продуктов из них указывает Всемирная Организация Здравоохранения (ВОЗ).
    Микробиологические   критерии   являются   одними   из  

важнейших  при
определении  пригодности  моллюсков  в  пищу. Во многих странах

разработаны
различные  бактериологические  стандарты  чистоты моллюсков,

большинство из
которых, несмотря на некоторые отличия между собой, основаны на

определении
бактерий  группы  кишечной  палочки.  Стандарты  разных  стран

допускают их
различное  содержание  в  моллюсках  -  от  5  до менее 1 клетки в 1

г тела
моллюсков.   Учитывая   случаи  пищевых  отравлений  моллюсками, 

вызванные
неспецифическими  микроорганизмами,  в  некоторые  стандарты  введены

также
                                                                      

4
ограничения  общего  количества  микроорганизмов  в  1 куб. см - 8 х

10  по
                                                          5
ГОСТу   БДС-780075  Народной  Республики Болгарии,  5 х 10  по 

английскому
стандарту.
    Обнаружение сальмонелл в объемах пищевых  продуктов,  превышающих

25 г,
не имеет эпидемиологического значения.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
    Вспышки   пищевых   токсикоинфекций,   вызываемые  

парагемолитическими
вибрионами, при  употреблении  в  пищу  морепродуктов  отмечены  во 

многих
странах    мира.    Продукты,   вызывающие   эти   отравления,  

обсеменены
                                                    6
парагемолитическими вибрионами на высоком уровне (10 /г и выше).
В СССР мидии и устрицы используются в пищу в различном виде - сыром (живом) и после

термической обработки. В зависимости от этого целесообразно ввести различные

бактериологические нормативы для этих двух видов продуктов.
Устрицы и мидии, направленные в торговую сеть для реализации и употребления в пищу в

живом виде, должны соответствовать требованиям, приведенным в табл. 5.1.
Таблица 5.1
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ МИДИЙ И УСТРИЦ, НАПРАВЛЯЕМЫХ
ДЛЯ РЕАЛИЗАЦИИ В ЖИВОМ ВИДЕ
----T-------------------T-----------------------T----------------¬
¦ N ¦    Наименование    ¦ Допустимый показатель ¦ Периодичность  ¦
¦ п/п ¦      бактерий      ¦                        ¦     контроля    ¦
+---+-------------------+-----------------------+----------------+
¦    ¦                    ¦                4       ¦                 ¦
¦ 1. ¦ Общая бактериальная ¦ Не более 2 х 10  в     ¦ каждая партия   ¦
¦    ¦ обсемененность     ¦ 1 куб. см              ¦                 ¦
¦ 2. ¦ Бактерии группы    ¦ Отсутствие в 1 куб. см ¦ -"-             ¦
¦    ¦ кишечной палочки   ¦                        ¦                 ¦
¦ 3. ¦ Сальмонеллы        ¦ Отсутствие в 25 куб. см ¦ периодически <*> ¦
¦ 4. ¦ Парагемолитические ¦ Отсутствие в 25 куб. см ¦ -"-             ¦
¦    ¦ вибрионы           ¦                        ¦                 ¦
L---+-------------------+-----------------------+-----------------
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
--------------------------------
<*> Анализ на сальмонеллы и другую патогенную микрофлору проводится по

эпидемиологическим показаниям, по требованию органов саннадзора в указанных ими лабораториях.
Мидии и устрицы, используемые для приготовления консервов или термически обработанных

кулинарных изделий, не должны содержать более 5 клеток БГКП в 1 куб. см гомогената моллюсков.
6. САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ МОРСКОЙ ВОДЫ
Одновременно с санитарно-микробиологическим контролем моллюсков производится контроль

морской воды из районов разведения и добычи моллюсков. Санитарно-микробиологический

контроль морской воды предусматривает определение общего количества микроорганизмов и БГКП.
6.1. Отбор проб морской воды
Отбор проб морской воды в районах мидийных и устричных плантаций производится с

плавсредств с поверхности над коллекторами и с глубины у окончания нижней подборы коллектора.
Отбор морской воды с поверхности производится в стерильную посуду емкостью 500 куб. см,

погружаемую на 15 см от поверхности воды. Отбор воды с глубины производится

простерилизованным батометром.
Отобранная морская вода доставляется в наиболее кратчайшие сроки в лабораторию. Доставка в

летнее время производится в сумках "Холод" или в специально приспособленных термосах со льдом.
К пробам прилагается сопроводительная документация с подписью ответственного лица, в

которой указывается район отбора пробы, глубина, температура воды, время и дата отбора пробы.
6.2. В настоящее время в районах выращивания промысловых видов моллюсков санитарно-

микробиологический контроль морской воды и определение ее качества производится в

соответствии с "Методическими указаниями по гигиеническому контролю загрязнения морской

среды" от 19.01.81.
1   2   3

Похожие:

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon4 ноября 1987 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция устанавливает правила и методы микробиологического контроля и

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon18 июня 1984 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
...

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon28 декабря 1987 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconСогласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Инструкция разработана в лаборатории гигиены промышленной переработки молока вними

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon26 мая 1975 года Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко
При составлении Правил в основу были приняты законоположения об охране атмосферного

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon21 ноября 1988 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon7 мая 1985 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Рекомендации разработаны сотрудниками Московской сельскохозяйственной академии им. К. А

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon28 июня 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция предназначена для производственных лабораторий, осуществляющих

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon27 августа 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция разработана специалистами лаборатории защиты от вредителей и санитарной

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon27 августа 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция разработана специалистами лаборатории защиты от вредителей и санитарной

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon30 августа 1990 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция распространяется на все предприятия и цехи по переработке птицы, а

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Зенит", "Плазма-4", умпо и др., предназначенных для работ вручную, в полуавтоматическом

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Санитарные правила устанавливают общие требования к приготовлению, хранению и применению смазочно-охлаждающих жидкостей (сож) и технологических...

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconСогласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Инструкция подготовлена взамен Инструкции по упаковке пищевой рыбной продукции в

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconПостановление Главного государственного санитарного врача РФ от 17...
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 17 марта 2014 г. N 9

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Рост производства полимерных материалов и широкое применение их в различных отраслях


Инструкция




При копировании материала укажите ссылку © 2000-2017
контакты
instryktsiya.ru
..На главную