24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко


страница1/3
  1   2   3
Утверждаю
Заместитель Министра
рыбного хозяйства СССР
А.Н.ГУЛЬЧЕНКО
24 марта 1983 года
Согласовано
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 марта 1983 года
(письмо N 123-5/133"А"-12)
Начальник Центральной
санитарной инспекции
Б.А.ДАВЫДОВ
3 февраля 1983 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО САНИТАРНО-

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ КОНТРОЛЮ ЧЕРНОМОРСКИХ МИДИЙ И

УСТРИЦ
(В порядке производственного испытания)
1. ВВЕДЕНИЕ
Методические указания рассчитаны на работников производственных лабораторий и

санэпидстанций при проведении санитарно-бактериологического контроля устриц и мидий,
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
используемых на пищевые цели в свежем виде или для приготовления пищевой продукции.
Двустворчатые моллюски (устрицы, мидии) в процессе своей жизнедеятельности в организме

накапливают микроорганизмы из окружающей их морской воды. Поэтому в моллюсках, выловленных

или выращенных в загрязненных районах моря, могут быть различные микроорганизмы и вирусы,

патогенные для человека.
Способность моллюсков к накоплению из морской воды патогенных для человека

микроорганизмов и то, что некоторые виды из них, например, устрицы и мидии, употребляются в

пищу в свежем (живом) виде без предварительной термической обработки обуславливает особые

требования к этому виду пищевой продукции.
При составлении Методических указаний использованы методики, разработанные МНИИГ им.

Ф.Ф. Эрисмана, 2-м Московским медицинским институтом, опробованные авторами инструкции

при санитарно-бактериологическом контроле моллюсков на Черном море, требования, содержащиеся

в ТУ 15-04-352-80 и ТУ 15-04-354-80, "Устрицы черноморские живые", "Мидии черноморские

живые", данные отечественной и зарубежной санитарной статистики.
2. СХЕМА И ПЕРИОДИЧНОСТЬ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО
КОНТРОЛЯ МОЛЛЮСКОВ
Санитарно-микробиологический контроль устриц и мидий проводится бактериологическими

лабораториями предприятий, хозяйств и санэпидстанциями.
Контролируется каждая подготовленная к реализации партия моллюсков. Партией считаются

устрицы или мидии одного района и даты вылова или подъема коллекторов, предъявляемые одним

предприятием к одновременной сдаче-приемке и оформленные одним документом, удостоверяющим

их качество.
В каждой партии моллюсков (устриц и мидий) определяется содержание бактерий группы

кишечной палочки, общая бактериологическая обсемененность, а наличие сальмонелл и

парагемолитических вибрионов производится по эпидемиологическим показаниям по требованию

органов саннадзора в указанных ими лабораториях.
3. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ К МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОМУ АНАЛИЗУ
Для проведения микробиологических исследований из разных мест партий устриц или мидий,

предназначенных к реализации, отбирают по 10 экземпляров моллюсков. Моллюсков очищают от

обрастаний и промывают под струей проточной воды. После этого наружную поверхность створок

моллюсков облучают в боксе ультрафиолетовыми лучами ртутно-кварцевой лампы 15 - 20 мин. Затем

профламбированным скальпелем разрезают мускул-замыкатель, раскрывают створки и извлекают

мясо моллюсков (мантию, жабры, печень, ногу и др. органы) с межстворчатой жидкостью. Ткани

моллюсков измельчают сначала профламбированными ножницами, затем в стерильной фарфоровой

ступке пестиком со стерильным песком или в гомогенизаторе до получения однородной массы.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Из 1 куб. см гомогената готовят разведения на стерильном физиологическом растворе для

определения общей бактериальной обсемененности; оставшийся гомогенат используют для

проведения других исследований - определения содержания бактерий группы кишечной палочки,

наличия сальмонелл и парагемолитических вибрионов.
4. МЕТОДИКИ КОНТРОЛЯ
4.1. Определение общей бактериальной обсемененности
Общая бактериальная обсемененность определяется по количеству колоний сапрофитных

бактерий (мезофильных аэробов и факультативных анаэробов), вырастающих при посеве 1 куб. см

или 1 г исследуемого материала на обычных питательных средах (РПА и др.) за 24 часа при 37 °С,

образующих колонии, видимые простым глазом или при увеличении в 2 - 5 раза.
4.1.1. Проведение анализа
В зависимости от предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных

объемов гомогената мидий или устриц, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках Петри

вырастало не более 300 колоний.
                                                 -1     -2     -3
    Для   получения   разведений  гомогената  (10  ,  10  ,  10    и 

т.д.)
используют стерильный физиологический раствор.
Из пробирок с разведениями гомогената в соответствии со степенью предполагаемого

загрязнения берут по 1 куб. см и вносят в стерильные чашки Петри. На крышках чашек Петри перед

посевом необходимо написать номер пробы, разведение и дату посева. Посевы заливают 15 - 25 куб.

см расплавленного в водяной бане и охлажденного до 45 °С питательного агара (РПА, РПА на

морской воде). После застывания агара чашки переворачивают крышкой вниз и помещают в

термостат с температурой 37 °С. Инкубирование производят 24 часа.
Подсчет колоний производят при помощи лупы с увеличением в 2 - 5 раз или прибора для счета

колоний. Для удобства каждую подсчитанную колонию отмечают со стороны дна чашки тушью или

чернилами для стекла.
Если на чашках вырастает свыше 300 колоний и анализ нельзя повторить, колонии

подсчитывают при помощи пластинки с сеткой и лупы при сильном боковом освещении.

Подсчитывают не менее 20 квадратов площадью 1 кв. см каждый в разных местах чашки, затем

выводят среднее арифметическое числа колоний на 1 кв. см, величину которого умножают на

площадь чашки.
Не учитывают чашки, на которых преобладает ползучий рост спорообразующих бактерий. Если

он занимает менее половины площади чашки, то подсчет колоний производят на свободном участке,

применяя счетную пластинку. При этом подсчитывают квадраты на свободных от сплошного роста

местах чашки.
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Результаты подсчета колоний в каждой чашке выражают в количестве бактерий на 1 куб. см

анализируемого гомогената мидий или устриц, для чего число выросших на чашке колоний

умножается на степень разведения гомогената. За окончательное количество бактерий принимается

среднее арифметическое результата подсчета на 2 - 3 параллельных чашках или различных

разведений.
4.2. Определение бактерий группы кишечной палочки
(БГКП)
Определение количества БГКП производится в 2-х параллельных рядах путем посева различных

объемов (1,0; 0,1; 0,01 куб. см) гомогената моллюсков в лактозно-пептонную среду. Инкубация посева

производится при 37 °С в течение 18 - 24 часов.
Учет результатов производится по образованию кислоты и газа. Из этих пробирок, а также из

пробирок с образовавшейся кислотой, но без газа или с наличием газа при слабом образовании

кислоты производят подтверждающий высев на среду Эндо. Посевы инкубируют 18 - 24 часов при

37 °С.
Если на секторах среды Эндо выросли темно-красные с металлическим блеском и без него,

розовые и бесцветные колонии, то их принадлежность к БГКП подтверждают микроскопированием

мазков, окрашенных по Граму, и постановкой оксидазного теста.
4.2.1. Окраска по Граму (в модификации МНИИГ им. Ф.Ф. Эрисмана)
На предметное стекло, тщательно протертое спиртом, наносят с лицевой стороны стекла

карандашом для стекла квадраты по числу мазков.
При исследовании роста на плотных средах наносят бактериологической петлей каплю

дистиллированной воды, в нее вносят небольшое количество исследуемой культуры, затем 1 каплю

красителя А и все тщательно смешивают. Оставляют на несколько минут до подсыхания (не

подогревать над горелкой!), после чего фиксируют трехкратным проведением над пламенем горелки.

Препарат промывают дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой и наливают

краситель Б. Продолжительность второй окраски от 0,5 до 5 мин. Затем препарат промывают

дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют.
4.2.2. Постановка оксидазного теста
Оксидазный тест является одним из тестов, позволяющих дифференцировать БГКП от

вибрионов, аэромонад, псевдомонад и др., обладающих положительной оксидазой.
По 2 - 3 изолированные колонии с секторов среды Эндо снимают бактериологической петлей и

поочередно наносят штрихом на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом,

приготовленным по прописи, указанной в п. 7.2.5. Если бактерии имеют активную оксидазу, то на

месте нанесения культуры появляется синее окрашивание. При отрицательной реакции цвет

бактериальной массы не изменяется.
4.2.3. Оценка результатов анализа определения БГКП
Результаты анализа выражают в количестве БГКП в 1 куб. см гомогената тела моллюсков.

Определение индекса производят по таблице индексов при двухрядовом определении по Хоскинсу-
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
Муру. Учету подлежат только лактозоположительные кишечные палочки с отрицательной реакцией

на оксидазу.
4.3. Определение сальмонелл
Определение сальмонелл производят только в лабораториях, имеющих разрешение

санэпидстанции.
Наличие сальмонелл определяют, используя жидкие среды накопления с высевом на плотные

элективные среды, выделением чистых культур, биохимической и серологической идентификацией.
Наличие сальмонелл определяют в 25 куб. см гомогената, засеваемого в 100 куб. см магниевой

среды накопления. Через 20 - 24 часа инкубации посевов при 37 °С по 1 петле из каждой колбы

высевают на 1 - 2 чашки с висмут-сульфитной средой. Продление инкубации посевов на висмут-

сульфитной среде до 48 часов повышает результативность исследований.
На висмут-сульфитной среде сальмонеллы вырастают в виде черных колоний с металлическим

блеском, просвечивающие с обратной стороны. Некоторые биовары сальмонелл, не продуцирующие

сероводорода, могут вырастать в виде зеленых колоний.
Для получения достоверных результатов необходимо снимать с чашек возможно большее число

колоний.
С висмут-сульфитной среды производят пересев на среду ДУКС-5. Посев производят штрихом

по скошенной поверхности и уколом в толщу столбика. Посевы инкубируют при 37 °С 20 - 24 часа.

При росте сальмонелл происходят изменения в среде ДУКС (изменение цвета, газ, образование

сероводорода).
4.3.1. Изучение серологических свойств сальмонелл
Изучение серологической структуры сальмонелл производится с помощью постановки реакции

агглютинации на стекле с поливалентными и монорецепторными агглютинирующими

адсорбированными сальмонеллезными сыворотками.
Сухие сыворотки перед употреблением растворяют согласно "Наставлению по применению",

вкладываемому в каждый набор сывороток.
Для реакции агглютинации с О-сыворотками берут односуточную культуру в верхней части, с

Н-сыворотками - с нижней части скошенного питательного агара, т.к. внизу находятся самые

подвижные особи. Вначале при помощи поливалентной сальмонеллезной О-сыворотки

устанавливается принадлежность исследуемой культуры к одной из серологических групп

сальмонелл. Для определения серологического типа культуры используют Н-монорецепторные

сыворотки 1 и 2 фаз.
4.4. Определение бактерий группы
парагемолитических вибрионов
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
    Для  выделения  парагемолитических  вибрионов  25  куб. см

исследуемого
гомогената   тела  моллюсков  засевают  в  колбу  со  100  мл  1-

процентной
пептонной  воды  с  3-процентным  хлористым  натрием.  Параллельно 

готовят
                          -1    -2    -3
Разведения  гомогената (10  , 10  , 10  )  на  1-процентной 

пептонной воде
с  3-процентным  хлористым  натрием,  которые  высевают  на  чашки 

на одну
из   плотных   элективных   дифференциальных   сред  -  агар  с 

вторичными
алкилсульфатами   натрия,  цветную  среду   Касаткина,  ТСВ  в 

модификации
московской Горсэс, дифференциально-диагностический агар.
Посевы инкубируют в термостате при 37°. Через 16 - 18 часов делают пересев из среды

накопления на элективную дифференциальную среду и просматривают чашки с посевами.

Парагемолитические вибрионы образуют на средах, содержащих сахарозу и индикатор

бромтимоловый синий, плоско-выпуклые полупрозрачные колонии, круглые с ровными краями,

окрашенные в цвет среды (сине-зеленые), от 1 до 5 мм диаметром, а алгинолитические - желтые

неправильной формы.
При наличии подозрительных колоний на следующем этапе определяют принадлежность

выделенных культур к вибрионам.
Отобранные колонии пересевают на среду Хью-Лейфсона и на щелочной агар с 3-процентным

хлористым натрием (ЩМПА). Посевы инкубируют при температуре 37° в течение 16 - 24 часов. Из

культур, выросших на ЩМПА, окисляющих и ферментирующих глюкозу на среде Хью-Лейфсона,

готовят мазки, которые окрашивают по Граму, определяют подвижность и ставят оксидазную пробу.

При обнаружении в мазках грамотрицательных прямых или изогнутых подвижных палочек и при

наличии у культуры оксидазной активности для окончательной идентификации проводят следующие

исследования (табл. 4.4.1):
1. Определение степени галофилии;
2. Расщепление углеводов и спиртов;
3. Определение протеолитической активности;
4. Определение способности к образованию индола;
5. Определение способности образовывать ацетилметилкарбинол (ацетоин, реакция Фогес-

Проскауэра);
6. Реакция с метиловым красным;
7. Декарбоксилирование аминокислот (аргинин, лизин);
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья – www.alppp.ru. Постоянно действующий третейский суд.
8. Определение гемолитических свойств.
4.4.1. Тесты окисления-ферментации глюкозы
Способность выделенных культур окислять и ферментировать глюкозу определяют на среде

Хью-Лейфсона. Каждую культуру засевают в две пробирки, после чего в одну из них вносят

примерно 0,5 куб. см стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют в течение 24 часов. Об

окислении судят по изменению окраски среды из зеленого в желтый цвет в пробирке без

вазелинового масла, о ферментации - по той же окраске в пробирке с маслом.
Таблица 4.4.1
  1   2   3

Поделиться в соцсетях



Похожие:

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon4 ноября 1987 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция устанавливает правила и методы микробиологического контроля и

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon18 июня 1984 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
...

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon28 декабря 1987 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция по микробиологическому контролю производства на предприятиях

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconСогласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Инструкция разработана в лаборатории гигиены промышленной переработки молока вними

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon26 мая 1975 года Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко
При составлении Правил в основу были приняты законоположения об охране атмосферного

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon21 ноября 1988 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Не является официальной версией, бесплатно предоставляется членам Ассоциации лесопользователей Приладожья, Поморья и Прионежья

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon28 июня 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция предназначена для производственных лабораторий, осуществляющих

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon7 мая 1985 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Рекомендации разработаны сотрудниками Московской сельскохозяйственной академии им. К. А

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon27 августа 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция разработана специалистами лаборатории защиты от вредителей и санитарной

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon27 августа 1991 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Инструкция разработана специалистами лаборатории защиты от вредителей и санитарной

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко icon30 августа 1990 года Согласовано Заместитель Главного государственного...
Настоящая Инструкция распространяется на все предприятия и цехи по переработке птицы, а

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Санитарные правила устанавливают общие требования к приготовлению, хранению и применению смазочно-охлаждающих жидкостей (сож) и технологических...

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconСогласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Инструкция подготовлена взамен Инструкции по упаковке пищевой рыбной продукции в

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconПостановление Главного государственного санитарного врача РФ от 17...
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 17 марта 2014 г. N 9

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconУтверждаю Заместитель Главного государственного санитарного врача...
Рост производства полимерных материалов и широкое применение их в различных отраслях

24 марта 1983 года Согласовано Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР а. И. Заиченко iconПостановление Главного государственного санитарного врача РФ от 27...
Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 27 декабря 2013 г. N 73


Инструкция




При копировании материала укажите ссылку © 2000-2017
контакты
instryktsiya.ru
..На главную